ABSTRACT
Se evaluó la seroprevalencia de anticuerpos tipo IgG anti-Trypanosoma cruzi en tres bancos de sangre públicos del oriente Venezolano (estado Sucre: Hospital Universitario Antonio Patricio de Alcalá Cumaná; Hospital Santos Aníbal Dominicci Carúpano; estado Monagas: Hospital Núñez Tovar, Maturín). Se evaluaron 1.301 sueros provenientes de donantes (rango de edad: 18 a 59 años), de ambos sexos. Quinientos dieciocho (n=518) procedieron del banco de sangre del Hospital de Cumaná, 281 del banco de sangre del Hospital de Carúpano y 502 del banco de sangre del Hospital de Maturín. El diagnóstico serológico fue realizado mediante la prueba de ELISA (EPI-ELISA) y como prueba confirmatoria la técnica de Western blot (TESA-blot). Para la evaluación de los resultados de las pruebas no concluyentes, se empleó una tercera prueba serológica (inmunofluorescencia indirecta: IFI). La seropositividad de anticuerpos tipo IgG anti-T. cruzi fue de 0,6% (8/1301 donantes) en los tres bancos de sangre evaluados. La seroprevalencia de infección por T. cruzi en los tres bancos de sangre públicos estudiados resultó baja; no obstante, se recomienda aplicar más de una prueba serológica para mejorar el diagnóstico de la enfermedad de Chagas en los bancos de sangre de Venezuela.
The seroprevalence of IgG type anti-Trypanosoma cruzi antibodies was evaluated at three public blood banks in Eastern Venezuela (Hospital Universitario Antonio Patricio de Alcala, Cumaná and Hospital Santos Anibal Dominici, Carúpano, Sucre State; and Hospital Nuñez Tovar, Maturin, Monagas State). The evaluation included 1,301 serum samples obtained from donors (ages: 18-59 years, both sexes). Five hundred and eighteen (N=518) came from the blood bank at the Hospital in Cumaná, 281 from the blood bank at the Hospital in Carúpano, and 502 from the blood bank at the Hospital in Maturín. The serologic diagnosis was done by the ELISA test (EPI-ELISA) and as confirmation we used the Western blot test (TESA-blot). For the evaluation of non conclusive results we used a third serologic test (indirect immunoflourescence (IIF)). Seropositivity of IgG type anti-T. cruzi antibodies was 0.6% (8/1301 donors) from the 3 blood banks evaluated. T. cruzi infection seroprevalence at the 3 blood banks studied was low; nevertheless, it is recommended to apply more than one serologic test to improve the diagnosis of Chagas disease at Venezuelan blood banks.
ABSTRACT
Los antígenos excretados/secretados por las formas tripomastigotes de T. cruzi (antígenos TESA) pertenecen a la familia de las transialidasas, las cuales son responsables de la transferencia de ácido siálico exógeno a moléculas aceptadoras en la superficie de los tripomastigotes. En el presente trabajo se purifican varias proteínas de los antígenos TESA utilizando cromatografía de afinidad con resina de sefarosa B4-concanavalina A, con la intención de ser utilizados en el diagnóstico de la enfermedad de Chagas. El buffer de elución contenía una mezcla de α-D-manopiranósido y α-D-glucopiranósido. Se realizó electroforesis unidimensional en gel con poliacrilamida para identificar las bandas purificadas y la prueba de inmunoelectrotransferencia para visualizar las bandas reactivas con el pool de sueros de individuos con infección por T. cruzi. El gel teñido con azul de Coomassie coloidal permitió visualizar 3 bandas de aproximadamente 220, 170, y 20 kDa. La inmunoelectrotransferencia utilizando un pool de sueros positivos, confirmados para la infección por T. cruzi, reveló 5 bandas inmunogénicas de 220, 120, 85, 50 y 32 kDa mientras que el revelado con diaminobenzidina permitió observar las bandas de 220, 120, 85, 50 32 y 20 kDa. Asimismo las bandas purificadas no fueron reconocidas en la inmunoelectrotransferencia por el pool de sueros confirmados como negativos. Estos resultados sugieren el potencial de estas proteínas purificadas de TESA para ser usadas como nueva herramienta para el diagnóstico de la enfermedad de Chagas.
Trypanosoma cruzi excreted/secreted antigens (TESA) belong to the transialidase family, which are responsible for the transfer of exogenous sialic acid to accepting molecules at the trypomastigote surface. In the present study we purified several proteins from TESA antigens using affinity chromatography with sepharose B4-concanavalin A resin, with the purpose of using them for Chagas disease diagnosis. The elution buffer contained a mixture of α-D-manopiranosid and α-D-glucopiranosid. A unidimensional electrophoresis in polyacrilamide gel to identify the purified bands, and an immunoelectrotransference test with a pool of sera from T. cruzi infected individuals to visualize the reactive bands were carried out. The colloidal Coomassie blue stained gel allowed visualizing 3 bands of approximately 220, 170 and 20 kDa. The immunoelectrotransference using a pool of positive sera with confirmed T. cruzi infection showed 5 immunogenic 220, 120, 50 and 32 kDa bands, while a developing with diaminobenzidine showed 220, 120, 85, 50, 32 and 20 kDa bands. The purified bands were not recognized in an immunoelectrotransference test when a pool of confirmed negative sera was used. These results suggest the potential of these TESA purified proteins for using them as a new tool for Chagas disease diagnosis.
ABSTRACT
Se evaluó la seroprevalencia de anticuerpos IgG anti-Trypanosoma cruzi, en la población rural de Miraflores, estado Monagas. En el estudio participaron 106 individuos (edades: 4 a 79 años) de cualquier género. El diagnóstico serológico fue realizado mediante la prueba de ELISA utilizando antígenos fijados de las formas epimastigotes de T. cruzi. Se evaluó la estabilidad del antígeno utilizado y las diferencias en la reactividad de dos cepas distintas de T. cruzi (complejo Tulahuen-Brasil y cepa RG1). La seropositividad de anticuerpos de tipo IgG anti-T. cruzi, con la cepa RG1 y la mezcla de cepas Tulahuen-Brasil, fue 2,8%. Se observó una correlación positiva entre la edad de los pacientes y la densidad óptica de la determinación de anticuerpos tipo IgG anti-T. cruzi presentada por la prueba de ELISA, para las dos cepas. La cepa Tulahuen-Brasil mostró mayor reactividad que aquella obtenida con la cepa RG1. Los antígenos fijados (mezcla de cepas Tulahuen-Brasil) mantuvieron su estabilidad y reactividad por un período de 5 años, lo cual hace de este tipo de antígeno un excelente candidato para las pruebas de diagnóstico. En la zona de estudio estuvieron presentes las variables epidemiológicas de riesgo para la reactivación de la infección en esta región de Venezuela.
The seroprevalence of anti-Trypanosoma cruzi IgG was evaluated in the rural population of Miraflores, Monagas State. The study included 106 individuals (ages: 4 to 79 years) of any sex. The serologic diagnosis was done through the ELISA test using as antigen fixed T. cruzi epimastigote forms. The stability of the antigen used was evaluated, as well as the differences in reactivity of the two different T. cruzi strains used (the Tulahuen-Brasil complex, and the RG1 strains). Seropositivity of anti-T. cruzi IgG type antibodies with the RG1 strains and the mixture of Tulahuen-Brasil strains was 2.8%. There was a positive relationship between the age of patients and the optical density of the anti-T. cruzi IgG type antibody determination shown by the ELISA test for both strains. The Tulahuen-Brasil strains showed greater reactivity than the one seen with the RG1 strain. Fixed antigens (mixture of Tulahuen-Brasil strains) maintained their stability and reactivity during a five-year period, which means that this antigen is an excellent candidate for diagnostic tests. The epidemiological risk variables for the reactivation of this infection were present in this region of Venezuela.